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細(xì)胞轉(zhuǎn)染：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個實驗方法

實驗原理脂質(zhì)體(LR)試劑是陽離子脂質(zhì)體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下方面的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時，首先需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h，開始，按這兩個參數(shù)繪出相應(yīng)LR需...

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細(xì)胞計數(shù)與存活測試實驗介紹

實驗材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計數(shù)器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計數(shù)器(Coultercounte...

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗介紹

一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實驗材料。二、實驗原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝...

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細(xì)胞株與細(xì)胞系的區(qū)別介紹

一、細(xì)胞株細(xì)胞株（CellStrain）：也就是說，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline)，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系(finitecellline)，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuouscellline)，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過選擇法或克...

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IPS細(xì)胞操作方法

操作規(guī)程一、復(fù)蘇1、事先用Matrix進(jìn)行培養(yǎng)皿/板的包被處理。平時Matrix保存在-20℃，使用之前放在4℃冰箱或冰上進(jìn)行解凍。待Matrix解凍后，按1：100的比例迅速用PBS液體稀釋。按6孔板每孔加1ml，150px皿加2ml，250px皿加3ml的量加入，加入后迅速搖動皿/板，使加入的Matrix*覆蓋整個皿底。放到37℃培養(yǎng)箱中4小時，使用前去掉包被液（如果暫時不使用，用封口膜密封，在4℃冰箱能保存一周）。2、復(fù)蘇前準(zhǔn)備iCell解凍*培養(yǎng)基（iCell解凍液基...

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